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Tsunade est la petite-fille du Premier Hokage, fondateur du village caché de Konoha, ainsi que la petite-nièce du second, ce qui lui valut son titre de « Princesse » (姫, Hime). De fait aussi, même si elle n'en porte pas le nom de famille, Tsunade est une descendante du fameux Clan Senju.

Elle fut entrainée aux arts ninja, en compagnie de Jiraya et Orochimaru, par le Troisième Hokage,Hiruzen Sarutobi. À l'époque, il est amusant de constater qu'elle était surnommée par Jiraya « La planche à pain » en raison de son absence totale de poitrine. Les choses avait bien changé car d'après les estimations de ce même Jiraya elle ferait aujourd'hui du 106 de tour de poitrine.